Immuunsuppressie in de tumormicro-omgeving (TME) belemmert kankerimmunotherapie, grotendeels door regulatoire T-cellen (Tregs). Hoewel immuuncheckpointremming de behandeling heeft getransformeerd, blijft Treg-gemedieerde onderdrukking van effectorcellen een uitdaging. Wij stellen een lipid-nanopartikel (LNP)-gebaseerde CRISPR-strategie voor die selectief intratumorale Tregs herprogrammeert, terwijl perifere Tregs gespaard blijven en systemische toxiciteit minimaal blijft. Door formulatiespecifieke mRNA-barcodes in LNP’s te integreren, maken we high-throughput screening mogelijk via een gepoolde injectie in het 4T1-muismodel voor triple-negatieve borstkanker. Dit faciliteert analyses van biodistributie, celopname, gene-editing en transcriptomics in Tregs, gekoppeld aan therapeutische uitkomsten. Daarnaast ontwikkelen we LCM-LNP-seq, een methode die laser capture microdissectie (LCM) en spatial transcriptomics combineert om de invloed van tumorarchitectuur, hypoxie en vaatstructuren op LNP-opname te onderzoeken. Deze inzichten dragen bij aan het rationele ontwerp van gerichte Treg-therapieën, met als uiteindelijk doel het versterken van de anti-tumorimmuniteit en het minimaliseren van systemische toxiciteit.