Dit onderzoeksvoorstel richt zich op innovatieve tools voor cysteïneconjugatie op basis van dubbele Michael-acceptor-crosslinkers. Dit soort reagentia hebben al toepassingen in het ontwerp van macromoleculaire thiol-yn netwerken, waarin de reactiviteit van de dubbele Michael-addities en retro-addities nauwkeurig kan worden afgesteld. In dit project zullen we het toepassingsgebied van deze dubbele Michael-acceptoren uitbreiden naar het domein van de bioconjugatie. De dubbele Michael-acceptoren laten controle toe van de kinetiek van de twee voorwaartse additiereacties, zodat gemengde adducten van twee thiolen kunnen worden gevormd. De hydrolytische en fysiologische stabiliteit van deze adducten kan worden verfijnd door het substitutiepatroon te veranderen. Bovendien zal getriggerde thiolafgifte door toevoeging van geschikte bis-nucleofielen worden onderzocht. We hebben al bemoedigende eerste resultaten bekomen met een reeks dubbele Michael-acceptoren, en we zullen ook meer innovatieve opties onderzoeken, waarbij de thiol-yn-chemie wordt gecombineerd met azide-alkyn- of hydrazon-ligaties, die beide gebruikt worden in bioconjugatie. De ontwikkelde methodes zullen worden toegepast voor peptidefunctionalisatie, peptidecyclisatie en peptidedisulfide-‘herbruggen’. De dubbele Michael-reacties maken het mogelijk een thiol-functionele lading op een cysteïne te bevestigen. Toepassingen in latere stadia zullen gericht zijn op eiwitconjugatie, waaronder monoklonale antilichamen.