Neonatale sepsis is een wereldwijd gezondheidsprobleem met bijzonder ernstige gevolgen in lage- en middeninkomenslanden die er niet in slagen het sterftecijfer te verlagen, wat de noodzaak benadrukt voor nieuwe en betaalbare modaliteiten om sepsis bij pasgeborenen te voorkomen en te behandelen. Klebsiella pneumoniae is de meest voorkomende oorzaak van neonatale sepsis en wordt geassocieerd met aanzienlijke resistentiepercentages. Een belangrijke virulentiefactor van K. pneumoniae is zijn capsule die wordt gebruikt voor adhesie en bescherming tegen verschillende immuunfactoren zoals fagocytose. Bacteriofaag-depolymerasen verwijderen de capsule van pathogene bacteriën, waardoor hun virulentie wordt geëlimineerd en ze worden opgeruimd. Het zijn snelwerkende en zeer stabiele enzymen, en er zijn slechts lage doses nodig. Hun specificiteit verklaart de microbiome-vriendelijke aard van hun werkingsmechanisme, wat resulteert in langdurige positieve gezondheidseffecten op de pasgeborenen. In dit project selecteren we de beste depolymerasen op basis van effectiviteit, opbrengst en stabiliteit, waarbij we voldoen aan criteria voor betaalbaarheid, en we verbreden hun specificiteit door cocktailontwerp en eiwitengineering met behulp van ancestrale sequentiereconstructie. De uiteindelijke leidende depolymerasen en een cocktail daarvan zullen worden onderworpen aan een in vitro en in vivo analyse met behulp van cellijnen (impact op celadhesie en fagocytose), een Galleria mellonella larveninfectiemodel (effectiviteit als therapeutisch en profylactisch middel) en een neonataal muismodel (preventie van neonatale sepsis door moederdarmdekolonisatie en behandeling van geïnfecteerde pasgeborenen) om de nodige gegevens te verzamelen ter ondersteuning van hun verdere ontwikkeling als een nieuwe modaliteit.