Het ontrafelen van de moleculaire mechanismen die de vroege embryonale ontwikkeling sturen is van groot belang voor assisted reproductive technology (ART) en voor fundamenteel onderzoek. CRISPR/Cas9 is een genbewerkingstool die in staat is om efficiënt gerichte DNA-sequenties in het genoom van de kiembaan te bewerken. In dit project zal ik CRISPR/Cas9 gebruiken om de mechanismen te bestuderen die betrokken zijn bij de vorming van het trophectoderm (TE) en de inner cell mass (ICM), de twee celtypes die gevormd worden tijdens de eerste lijnsegregatie. Eerst zal ik de functie van twee belangrijke TE-markers (Gata2/GATA2, Gata3/GATA3) bestuderen door gen knock-outs (KO) te genereren in zowel muizen- als mensenembryo's, aangezien belangrijke interspecies verschillen kunnen bestaan. Analyse van de KO embryo's op DNA, RNA en eiwitniveau zal meer informatie opleveren over de functie van de genen van interesse. Daarnaast zal ik ook het verband tussen deze transcriptiefactoren en cytoskeletale componenten onderzoeken tijdens de eerstse lijnssegregatie, door gebruik te maken van timelapse confocal imaging. Vervolgens zal ik dezelfde methodologie gebruiken om de functie van belangrijke ICM merkers (Sox2/SOX2, Nanog/NANOG) te ontrafelen, zowel in muizen- als in mensenembryo’s. Op deze manier wil ik een uitgebreid inzicht krijgen in de mechanismen die de FLS besturen, naast het ontrafelen van voorheen onbekende interspecies verschillen.