Code
01SC0211
Looptijd
01-03-2011 → 31-08-2014
Financiering
Gewestelijke en gemeenschapsmiddelen: Bijzonder Onderzoeksfonds
Promotor
Mandaathouder
Onderzoeksdisciplines
-
Natural sciences
- Animal biology
- General biology
- Microbiology
- Plant biology
-
Agricultural and food sciences
- Agricultural plant production
- Horticultural production
- Veterinary medicine
Trefwoorden
plaaginsecten
genactiviteit
biotechnologie
bladluizen
gewasbescherming
RNA interferentie
transcriptie
Projectomschrijving
Het belangrijkste doel is om de belangrijkste mechanismen voor de systemische werking van dsRNA en het succes van RNAi in vivo in erwtenluizen te onderzoeken. De specifieke doelstellingen zijn:
- om RNAi in vivo te volgen op een aantal goed geselecteerde RNA's die specifiek gericht zijn op sleutelgenen voor normale insectengroei, ontwikkeling en homeostase. Om de systemische verdeling te onderzoeken, hebben we doelwitten geselecteerd die aanwezig zijn op verschillende locaties in het insectenlichaam (darm, zenuwstelsel, endocrien systeem, epidermis, vetlichaam, geslachtsklieren), en ook in verschillende ontwikkelingsstadia (larve, volwassene). Hier ligt de nadruk op soort- en weefselspecifieke aspecten van systemische RNAi, en de resultaten kunnen dan helpen om RNAi te evalueren als een nieuwe strategie voor de bestrijding van plaaginsecten, met name belangrijke bladluizen als A. pisum.
- om de aanwezigheid en impact van fysieke barrières in het insectenlichaam en de kinetiek van cellulaire opname in verschillende weefsels voor succesvolle RNAi in vivo te onderzoeken. Voor dit doel zal live cel imaging microscopie met gelabelde dsRNA's worden gebruikt.
- om de orthologen van transporteiwitten (bijvoorbeeld wegvanger, SID, patroonherkenningsreceptoren) die betrokken zijn bij het opnameproces voor RNAi (zie gegevens uit 1 & 2) te bepalen door klonen, sequentiebepaling en expressieanalyse.
- om de functie van de transporteiwitten (uit deel 3) in insectencellen te onderzoeken:
- voor het screenen van een bibliotheek van cellijnen (dat wil zeggen primaire en continue cellen van verschillende soorten en weefsels, met inbegrip van de middendarm van insecten) voor competentie / refractievermogen bij opname van dsRNA;
- om refractaire cellijnen te manipuleren tot overexpressie van de geïdentificeerde transporteiwitten en evaluatie van systemische RNAi-verspreiding;
- in de cellijnen die competent zijn voor de opname van dsRNA, zullen knock-outs worden gemaakt van de transporteiwitten die verantwoordelijk zijn voor het opnameproces.