De huidige COVID-19-pandemie benadrukt de cruciale behoefte aan de snelle ontwikkeling van effectieve therapieën tegen opkomende infectieziekten. Monoklonale antilichamen (mAbs) zijn een veelbelovende therapeutische benadering van dergelijke ziekten en CHO-cellen zijn het werkpaard van de productie van mAb. Aangezien de CHO-productie niet snel genoeg is voor de pandemische reactie, kan gistgastheer Pichia pastoris de plaats van CHO innemen door de gemakkelijkere productie van VHH-Fc-producten die resulteren in effectorfunctionaliteiten en een lange halfwaardetijd. Het expressiesysteem van Pichia pastoris biedt verschillende mogelijkheden, waaronder hoge expressieniveaus, en de mogelijkheid om post-translationele modificaties te verwerken. Hier beschrijven we ons werk aan de productie van geglycosyleerde en geglycosyleerde VHH-Fcs met behulp van het Pichia pastoris-expressiesysteem. We zullen de Pichia-uitscheidingsroute ontwikkelen door gerichte evolutietechnieken die de ontwikkeling van een methode vereisen (PiZZAH in chemostaat) die ons in staat stelt om veel klonen te screenen. We zullen ook de N-glycosyleringsroute ontwikkelen om er CHO-type N-glycosylatie- en GlycoDelete-strategieën van te maken. Uiteindelijk zullen we een herhaald fed-batch-productiesysteem ontwikkelen, zodat we een verscheidenheid aan VHH-Fc's in optimale omstandigheden kunnen produceren.