CRISPR/Cas9 is een veelzijdige tool dat efficiënt DNA sequenties kan modificeren, waardoor betrouwbare modellen gecreëerd kunnen worden om een genfunctie te bestuderen. Ik zal deze techniek gebruiken om trofectoderm ontwikkeling te ontrafelen, met als focus inter-species verschillen tussen muis en mens verder bloot te leggen. Het trofectoderm is van instrumentaal belang tijdens het implantatieproces, en het bestuderen van zijn functie kan dus inzicht geven in de oorzaken van mislukte implantatie na artificiële reproductieve technologie. In dit onderzoeksproject focus ik op twee sleutelmoleculen van het trofectoderm, namelijk TFAP2C en GATA3, en zal ik hun expressie en lokalisatie doorheen de embryonale ontwikkeling en de consequenties na CRISPR-Cas9 gemedieerde gen knock-out, bij zowel mens als muis, documenteren. De analyse omvat de evaluatie van cellijn-specifieke merkers en gekende interactors van de twee transcriptiefactoren, alsook een beoordeling via single-cell transcriptomics, vertrekkende vanuit blastocysten of peri-implantatiestructuren, die uiterst relevant zijn om trofectoderm ontwikkeling en onderhoud te bestuderen. Ten slotte, afhankelijk van het resultaat van de individuele knock-out, zal ik sterk gelijkende proteïne isovormen (TFAP2a/c en GATA2/3) tackelen in humane embryo’s, om mogelijke functionele redundantie te evalueren, dat een milder fenotype zou kunnen veroorzaken in individuele knock-out embryo’s, wat al werd aangetoond in muis.