In het hier voorgestelde project zoeken we naar opheldering van de momenteel heersende verwarring omtrent het ontstaan van zijwortels bij Equisetum. Om de weefselidentiteit van endodermis en pericyclus alsook de aanleg van zijwortelinitialen te bepalen, zullen we bij aanvang een gedetailleerde analyse uitvoeren van de ontogenie en anatomie van de wortel. Bij gebrek aan genomische data in Equisetum, zal Spatial Enhanced Resolution Omics Sequencing (Stereo-seq) gecombineerd worden met de novo root transcriptome assembly om genen te aligneren en annoteren om een visuele gen-expressie atlas te bekomen met focus op het ontstaan van zijwortels. Op basis van de bekomen atlas zal vervolgens het expressiepatroon van ca 500 gevalideerd worden gebruik makende van Multiplexed Error-Robust Fluorescence In Situ Hybridization (MERFISH). Vervolgens zal een vergelijkende studie uitgevoerd worden met de in Arabidopsis beschikbare data om homologe transcriptiefactoren te identificeren die een vergelijkbaar expressiepatroon vertonen en dus representatief zijn voor een evolutionair oorspronkelijk mechanisme actief bij het vormen van zijwortels. In afwezigheid van transformatie-methodes voor Equisetum zal functionele karakterisering van de kandidaatgenen uitgevoerd worden in Arabidopsis. Dit project beoogt inzicht te verwerven in de ontwikkeling van wortels in Equisetum en op zoek te gaan naar moleculaire mechanismen die aan de basis liggen van het ontstaan van zijwortels.